کنترل کیفی و کالیبراسیون لوپ میکروب شناسی
نترل کیفی و کالیبراسیون لوپ میکروب شناسی
مقدمه : از بین وسایل مورد استفاده در بخش میکروب شناسی لوپ میکروب شناسی
از جمله ابزارهای مهم و اصلی بوده و ارزش آن همانند پی پت در آزمایشگاه
بیوشیمی و سرولوژی است .بدین معنی که اگر از مقدار برداشت شده توسط لوپ
محاسبه دقیق به عمل نیاید در گزارش نتایج آزمایش تاثیر زیادی خواهد داشت .
لذا به سبب عدم وجود روش استاندارد جهت کالیبراسیون لوپ و نظر به اهمیت آن
در این مقاله سعی شده است که راه کارهای مناسب و عملی برای کالیبراسیون لوپ
میکروب شناسی ارائه گردد . در بررسی انجام شده دو روش محاسبه حجم توسط روش
اسپکتروفتومتری و روش استفاده از ترازو مورد ارزیابی قرار گرفته اند .
روش بررسی : در این تحقیق حجم برداشت شده توسط دو نوع لوپ مورد مصرف که تحت
عنوان لوپ های تجاری در بازار موجود بوده و به عنوان لوپ 0.01 و لوپ 0.001
استفاده میشوند مورد بررسی قرار گرفت و نیز با توجه به اینکه برخی از
آزمایشگاه های تشخیص پزشکی لوپ های دست ساز را که با استفاده از پیچیدن سیم
به دور دسته فلزی لوپ تهیه می شوند مورد استفاده قرار می دهند این نوع
لوپ ها نیز به دو روش اسپکتروفتومتری و توزین مورد ارزیابی قرار گرفتند .
همچنین مقدار حجم برداشتی توسط لوپ ها به صورت تخمینی و از طریق ریاضی مورد
بررسی قرار گرفت .
الف ) روش اسپکتروفتومتری : در این روش از یک ماده رنگی که دارای جذب نوری
در طول موج خاص است استفاده می گردد . معمولا از ماده رنگی اوانس بلو برای
این آزمایش استفاده میشود اما با توجه به کمبود و گران بودن ماده مزبور در
این بررسی از متیلن بلو که از نظر اقتصادی به صرفه بوده و در اکثر
آزمایشگاه ها موجود است استفاده شد .
مواد مصرفی و معرف ها شامل موارد زیر بود :
پودر متیلن بلو – الکل طبی 96% ( اتانول ) – آب مقطر – لوپ های 0.01 و
0.001 و لوپ های دست ساز – لوله آزمایش – پی پت – سمپلر 20 لاندا –
اسپکتروفتومتر
ابتدا 0.2 – 0.1 گرم از پودر متیلن بلو را در حلالی که از مخلوط کردن آب
مقطر و الکل 96% به نسبت 50 به 50 تهیه شده حل می کنیم . پس از حل شدن کامل
متیلن بلو در حلال مزبور 8 لوله آزمایش انتخاب کرده در لوله اول 2 میلی
لیتر و در بقیه لوله ها 1 میلی لیتر از حلال ساخته شده را می ریزیم . سپس
مقدار 0.02 میلی لیتر از محلول متیلن بلو را به کمک سمپلر کالیبره شده به
محلول اضافه کرده و پس از مخلوط کردن 1 میلی لیتر از محلول مزبور را به
لوله دوم انتقال می دهیم و این عمل را تا لوله هشتم پی می گیریم ( رقت های
سریالی ).پس از تهیه رقت های مزبور جذب نوری هر یک از لوله ها را در طول
موج 663 نانومتر قرائت کرده و ثبت می کنیم .
با توجه به کاهش تصاعدی رقت لوله ها از کاغذ لگاریتمی برای تهیه منحنی
استاندارد استفاده میشود . پس از ترسیم منحنی برای کالیبره کردن لوپ 15-10
لوله برداشته و در هر یک از آنها 1 میلی لیتر از حلالی که تهیه کرده بودیم
می ریزیم و به کمک لوپ از محلول رنگی ( متیلن بلو ) در لوله ها وارد می
کنیم . پس از خواندن جذب نوری آنها در طول موج 663 نانومتر و به دست آوردن
میانگین جذب نوری و انتقال آن بر روی منحنی مقدار حجم برداشته شده توسط لوپ
به راحتی به دست می آید .
از آنجا که مقدار کلنی بر اساس CFU/ml ( colong forming unit ) گزارش می
گردد اگر 1 میلی لیتر را که برابر با 1000 لاندا می باشد بر حجم به دست
آمده تقسیم کنیم ضریب لوپ مجهول به دست خواهد آمد.
ب ) روش توزین : در این روش ترازوی حساس با دقت 0.001 گرم مورد نیاز است و
از آنجا که وزن و حجم آب مقطر خالص مساوی
ادامه نوشته
+ نوشته شده در یکشنبه ۱۳۹۱/۰۳/۱۴ ساعت توسط اشکان شعبانی
|
گروه میکروبیولوژی